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正文摘录:

临床和实验医学slt志2007年8月弟6卷弟8期TLR4和IL一1p在幽门螺杆菌感染的SPF级小鼠胃内的表达及其相关性刘翔卢放根(中南大学湘雅二医院消化内科湖南长沙410011)【摘要l目的比较SPF级小鼠在幽门螺杆茵(Hp)感染时和用三联疗法根除Hp后胃黏膜内Toll样受体4(11LR4)和白细胞介素一1B(IL—lp)在基因和蛋白水平上的表达含量变化，分析TLR4和1L一1p之间的相关性，探讨TLR4在Hp致病机制中的作用。方法20只成功感染Hp的SPF级BALB／c小鼠随机分为两组，第1组不予任何治疗，第2组予三联疗法治疗，并将10只正常SPF级BALB／c小鼠设为第3组。取各组小鼠的胃黏膜标本，用逆转录聚合酶链反应(RT—PcR)和蛋白质印记(westemblotting)的方法半定量检测TLR4、1L一113在基因和蛋白水平上的表达。结果①在基因和蛋白水平，第2组小鼠胃黏膜内TLR4和IL一113的表达均较第1组明显降低(P(0.05)。~TLR4与IL一113呈正相关。结论TLR4参与了Hp的致病机制，并且与IIJ一113呈正相关，TLR4通路与下游的IL一113炎症因子的激活相关。【关键词】幽门螺杆菌致病’rLR4IL一1BEx口re蝴oⅡandcorrelationofTLR4andEL一1Oingastricmn~saofHpinfectedSPFgrademice.LIUXiang，LUFang—gen·TheD培∞‘t沁肘ed妇f皿mnmⅢ.theSecondXiangyaHospital，CentralSouthUniversity，ChangshaHunan410011，China·【Abstract】ObjectiveTocomparetheexpressionofTLR4andIL一1pingastricmueosaofmiceatgeneandproteinleveldunn蚰e量。。。bac‘。。pyloft(Hp)infecti0D∞daftertheeradicationofHp.ThecorrelationbetweenTLR4andIL一1BandtheroleofTLR4inthepathogenicityofHpwereex舢i玎ed.Methods20SPFgradeBALB／emiceinfectedwithHpwererandomlyassignedtoreceivecombinationtherapyc0“sisledofⅡ。‘eedru鼬(group2)0rnotreatment(group1).10normalSPFgradeBALB／cmiceservedasnormalcontrolgroup【group3)·Fh。。xp‘。88’仰0tTLR4_皿dIL一113in胂hicnmcosa乱tIl。geneandproteinlevelw聃measuredusingRT—PCRandWesternblottingmethod·Results①A‘gene|曲dproteinlevel.theexpre姻ionofTLR4andIL一113ingaatriemucosawassignificantlydecreasedingroup2thaningroupl(P＜O·05)·②TLR4wasposifivelyo叩celatedwitIIIL一1B.ConclusionTLR4wasinvolvedinthepathogenicityofHpandwaspositivelycorreLatedwithIL一113TLR4DathwayiscorrelatedwithactivationofdownstreaminflammatoryfactorssuchasIL一1B-【Keywords】Helicobacterpylori；Pathogenicity；TLR4；IL一1p对于幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)的致病机制，已有的研究大部分专注于空泡细胞毒素(vacuolatingcytotoxinA，Va.cA)和细胞毒素相关蛋白(cytotoxin—associatedprotein，CagA)方面，而对脂多糖(LPS)等非VacA和CagA毒力因子研究较少；而对于Hp感染宿主后引起的炎症及免疫反应，既往的研究则专注于炎症反应的细胞因子方面，而对于其上游的信号途径及传导通路研究甚少。近年来国外虽有少量研究认为LPS及其受体Toll样受体(Toll—likereceptor，TLR)所介导的信号途径可能是Hp致病机制的重要信号通路，但证据较少，且意见不一，部分学者认为是TLR4参与的，而部分则认为是TLR2和TLR5而非TLR4。而且已有的研究都仅观察了Hp感染状态下TLR4的表达，而尚未考察治疗Hp感染后TLR4表达的变化。TLR4与下游细胞因子的关系，已有的研究也仅观察了核转录因子(NuclearfactorkappaB.NF—KB)和自细胞介素一8(InterLeukin一8，IL一8)，以及氧自由基和一氧化氮(NO)等因子的变化，其他下游炎症因子与nJt4是否相关，目前尚无研究。我院2006年4月至2007年3月进行试验，观察Hp感染和治疗Hp感染后TLR4表达的变化，以进一步确定TLR4途径是否参与了Hp的致病机制，同时观察TLR4与下游炎症因子白细胞介素一1p(InterLeukin—lbeta，IL一1p)表达的相关性，以确定TLR4在炎症反应中的作用。1材料和方法1.1实验材料1.1.1动物6.8周龄SPF级BALB／c小鼠，雌雄各半，体质量18±2g.共40只，购自武汉动物实验中心。1.1.2菌株Hp标准聚合酶链反应株SSl：购自中国典型培养物保藏中心(武汉大学保藏中心)。1.1.3材料和仪器心脑浸液干粉购自青岛高科园海博生物技术有限公司，快速尿素酶试剂盒购自福建三强生物化工有限公司，聚合酶链反应(PCR)相关试剂均购自Promega公司，Trizol购自Invitrogen公司，兔抗小鼠TLR4及羊抗兔二抗购自美国Sant‘Cruz公司，兔抗小鼠IL—lp及羊抗兔二抗购自武汉博士德公司，PVDF膜购自美国Pierce公司，TLR4及IL—lp引物购自北京鼎国生物技术有限公司。2700PCR仪购自ABI公司。1.2实验方法1.2.1制备Hp苗悬液无菌接种环从心脑浸液血平板上收集Hp菌落于无菌生理盐水成混悬液，比浊法调整菌悬液终浓度为1×10’CFU／ral。I.2.2实验动物分组及处理40只SPF级BALB／c小鼠，10只作为正常对照，剩余30只均用抗生素灌胃后再予Hp菌悬液灌胃造模，方法为第1—3天，每天予抗生素混合液0.5rnⅣ只灌胃，每天1次。第4天起，每天先禁食12h，再予新鲜Hp菌悬液灌胃，0.5ml／每只，每天1次，连续7d。造模后分别于第4.8周随机处死5只小鼠，取胃黏膜行快速尿素酶试验、Giemsa染色和细菌培养评估其Hp感染情况。8周后剩余20只小鼠随机分为2