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正文摘录:

临床和宴齄医学毒志2007年5月苇6叁苇5期22卵母细胞巢式RT—PcR结果GV、MI、MII卵细胞均可测到naRNA表达，阳性对照及内参B—actln均有表达，电泳结果分别见216bp、356bp扩增带。见图2。23植入前胚胎巢式RT—PCR结果胚胎2、4、6、8细胞期，阳性对照及内参B一丑c6n均有表达，电泳结果分别见216bD、356bp扩增带。见图3。24测序结果第二次PcR产物TA克隆，转化到大肠杆菌(Ecoli)，摇菌提质粒测序，扩增片断序列与NCBI公布的Snrpn基因mRNA序列吻合(180—550bp片断相吻合)(由上海基康生物技术有限公司测序)，见图4。500b一218b一5∞hp一3,51§bp—Hl磁M吖幕INIIPB一-B一-HB一^暑一^B一^B一^锄)0眨)[Gy)嗍I)觎Ⅱ)口)图2单个卵母细胞巢式RT—f*CR扩增结果GV、MI、M11人类卵细胞s“rp“基因cDNA的PcR扩增产物216bp；Gv、MI、MII及硐性对照的内参照B一明un管家基固扩增产物为356bp产物：P：为阳性对照；N1、N2：分别为卵细胞洗涤液、PHs试剂空白对照。500bp一216b，一500bp.3S6bD一2c虻6c8cPN1投伫c)“c)雠)∽It"l鲫)伪2)圈3单个卵裂球巢式RT—PcR扩增结果2…I】(2C：)、4一u(4c)、6一ll(6c)、8c枷(8c)阶段植入前单个卵裂球细胞srtrpn基因cI)NA的PcR扩增产物为216hp；内参照B…nn管家基因cDNA扩增产物为356bp；P为阳性对照；Nl、N2：分别为卵裂球细胞洗涤液、PBS试剂空白对照。图4sn甲n基因质粒测序结果3讨论印迹基因Snrprl即小分子核糖体蛋白多肽(伽uIlU(jlean仙。一nucle0pro#einpalype曲deN)，位于15qll—q13，全长38852bp，有12个外显子(TrmrtscnptIDENST00000338094)，23个cpC岛.可编码一种与小分子核糖体蛋白粒(small／11112learribonucleopro.teinpalyparticles，snRNlc’)相关的剪接体蛋白StuN，有5种不同的转录本。其作用是与前体RNA结合，从而影响到RNA剪接.进而翻译成不同的多肽。1992年，k盯等“引已证实Snrpn在鼠和人的机体组织上是母源性基因印迹、父源性基因表达。本研究对24枚不同时期的卵母细胞和62枚不同发展阶段胚胎的Snrpn基因mRNA表达试验，成功地检测出人类GV、MI、MII期卵母细胞和2一eell、4一cell、6堋Ⅱ、8一ceⅡ细胞胚胎均有tuRNA表达。Snlpn在人类卵母细胞GV期出现表达，推测卵母细胞中srlrpn积累影响该细胞进一步发育的能力，其转录水平对卵母细胞减数分裂的恢复也至关重要，是影响卵子成熟的基因之一。同时Snr—pn作为母源性印迹基因，对染色体的稳定和防止转位子的活化以降低配子突变的风险是很重要的”。。本研究证实Snrpn在胚胎2一cell阶段表达.在这个阶段已被证实有印迹调控区甲基化存在”…“。在细胞卵裂过程中，即细胞增殖，细胞间期短，分裂快，迅速分裂成8一cell.SnrpnmRNA在早期胚胎各阶段都有表达。Snrpn是前体RNA的剪接因子.对mRNA表达有重要调控作用，是早期胚胎正常发育所必需的基因，并可能与cpG岛甲基化外修饰共同有序地调控着胚胎生长发育。印迹机制目前研究认为是Snrpn印迹调控区域CpG岛上母源性等位基因甲基化，而父源性等位基因非甲基化”…，特异性甲基化区域(differentiallymethylatedregmns，DMRs)是控制印迹表达的重要因素，是一种非孟德尔遗传现象.属于表遗传修饰。该基因与细胞分化、增殖、胚胎正常发育、精神行为等有关”“，其突变及印迹功能的紊乱等可导致神经系统的发育异常”51”。如PWS和As综合征是临床上明显与基因组印迹有关的两种遗传病，PWS的主要特点是肥胖、张力减退、性腺功能减退和发育迟缓；AS通常为共济失调、睡眠障碍、癫痫及精神发育迟滞.个别AS患者有突然发作的傻笑兴奋面容、好动，被称为“快乐木偶”。目前研究认为srtrpn父源性基因在印迹区域微缺失、突变、易位等可引起PWS”“。”0，而父源性二倍体(unjparental出somy，uPD)及母源性印迹丢失与As有关”0’”。。同时，AS与母源性基因uBE3A在脑发育期间特异性母源表达异常有密切关系”…。在与snrpn相同染色体15ql1一q13区还有其他父源表达的印迹基因：IPW、ZGFl27、NDN、PAR—SN等，近年来研究表明也可能与PWS、As有关”。”。”。可见，印迹基因在卵子形成、成熟、精卵受精、胚胎发育起非常重要的作用。印迹功能的紊乱可引起胚胎发育异常，包括流产、畸形、胚胎死亡、生长迟缓和精神行为异常等，导致多种遗传性印迹疾病和诱发肿瘤”。。…。美、英、德国及澳大利亚等多个国家均报道了All'T可能干扰基因印迹形成，导致先天性印迹疾病。如Hallida)r等旧。人，比较1316500例活产和14894例经ⅣF出生的婴儿，印迹基因疾病的发病率比正常人群高9倍；Orstavik等Ⅲ’和Cox等Ⅲ0报道经ICSI出生的3例AS患儿，都是由于8mpn基因15qll—q13区域中印迹丢失而发病。动物的实验已为胚胎体外培养可以对印迹产生影响提供了有力的证据Ⅲ0。卵子和植入前胚胎体为印迹基因的甲基化印迹去除、建立和维持的关键窗口期”“.而此时期恰为ARq、体外干预阶段，All'T操作过程中某些环节，如体外不成熟卵子的培养、配子的低温冷冻及不成熟精子的ICSI等均有可能干扰其印迹形成，导致先天性印迹疾病。我们对印迹基因Snrpn在卵母细胞各期及植人前胚胎不同