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正文摘录:

应用科技第32卷后加入0.4g分子筛，再反应24h.抽滤，滤液用已知浓度的：Na()H一乙醇溶液滴定，求得酯化率为92.66％.3结果与讨论3.1温度对固定化脂肪酶酯化率的影响温度影响分子热运动的速度.在相同的固定化时间内，它将直接影响酶吸附到载体上的效率，而且高温还可导致蛋白质变性，甚至失活.因此酶在固定化时温度的选择十分重要.实验结果表明：在较低的温度下进行固定化，固定化载体吸附酶的量比较少，随着固定化温度的升高，分子运动逐渐加剧，载体对酶的吸附量有所提高.但是由于蛋白质在较高的温度下会失活变性，因此，在很高温度时，酶的活性反而下降.表1为温度对固定脂肪酸催化酯化率的影响.通过表1可知：最佳的固定化温度为45℃.表1温度对固定脂肪酶催化酯化率的影响温度／℃酯化率／％45.6561.7372.4085.7392.6691.0687.4455.893.2吸附时间对固定化脂肪酶酯化率的影响表2为吸附时间对固定化脂肪酶酯化率的影响.表2吸附时间对固定化脂肪酶酯化率的影响吸附时间／h酯化率／％12468122454.9669.5383.6792.6686.5480.5269.84由表2可知：实验开始时随着振荡时间地加长，固定化酶活力逐渐增加，6h后达到最大值，再继续振荡吸附，可能由于商品脂肪酶中含有蛋白水解酶等杂质，使酶活性下降.3.3固定化载体与酶量的比例对固定化脂肪酶酯化率的影响固定化载体可吸附的酶量是有限的，当固定化载体相对较少时，可能由于每个载体分子表面吸附的酶量相对过多，造成酶分子相互聚集成团，酶分子的活性中心有可能被遮盖.尽管吸附的酶量较多，但酶的催化活性仍较低.表3为固定化载体与酶量的比例对固定化脂肪酶酯化率的影响.表3固定化载体与酶量的比例对固定化脂肪酶酯化率的影响载体与脂肪酶的质量比酯化率％43.3860.4176.2288.5192.6691.0081.3075.47从表3可知：随着固定化载体的量相对增加，由于酶分子相互聚集所导致的酶分子的活性中心相互遮盖的程度逐渐减小，但当固定化载体超过一定量时，使得单位固定化的催化活力下降.通过实验表明：最适合大孔树脂与脂肪酶的比例为30：1(质量比).4结束语DM-130大孔树脂能较好地固定脂肪酶，克服了游离脂肪酶粉末在有机溶剂中失活的难题.控制适当的反应温度、反应时间以及用酶量可以得到活性较高的固定化脂肪酶.利用在最优化条件下所获得的高活性的固定化脂肪酶可顺利催化松香酸酯化反应.控制适当的反应温度、加水量、分子筛用量、反应时间及pH值，可以得到较高产率的松香酯，避免了以往合成松香酯所要求的苛刻条件.而且，所得固定化脂肪酶可重复使用数次，节约了成本，拓宽了松香酯的应用前景..通过本实验研究，获得了脂肪酶固定化的最佳条件：温度为45℃，pH值为8.0，吸附时间为6h，载体与脂肪酶的质量比为30：1.参考文献：[I]张军，徐家立.固定化假丝酵母1619脂肪酶催化油酸油醇酯的合成[J].生物工程学报，1995，11(4)：325—331.[2]千烟一郎.固定化酶[M].河北：河北人民出版社，1981.[3]何炳林.聚丙烯酸甲酯载体对柱状假丝酵母脂肪酶固定化的研究[J].离子交换与吸附，1994，10(4)：316—321.[责任编辑：姜海丽]mU加笱如巧∞钙揸如弱∞钙∞耶∞