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正文摘录:

中国医药工业杂志ChineseJournalofPharmaceuticals2005，36(9).539·ELSD—HPLC法监控维生素C生产过程耿文飞，王惠欣，蔡超靖，吴洪涛，贾茜*(华北制药集团新药研究开发有限责任公司，河北石家庄050015)摘要：建立了ELSD.HPLC法监控由山梨醇生产维生素C的过程。采用氨基色谱柱，流动相为0.1％三氟乙酸一乙腈(梯度洗脱)。4种成分均在0.025％～0.4％范围内线性关系良好。平均回收率分别为98.7％、100.5％、100.8％和100.4％。关键词：维生素C；高效液相色谱；蒸发光散射检测器中图分类号：TQ460.7’2；0657.7’1文献标识码：A文章编号：1001—8255(2005)09—0539—02二次发酵法[，，23是当前较先进的维生素C(1)生产工艺。本研究针对此工艺，运用了蒸发光散射检测器(ELSD)，建立了能够将原料D一山梨醇(2)、中间产物L.山梨糖(3)和2.酮.L.古洛糖酸(4)与产物1准确定量的HPLC检测方法。1仪器和试药Agilent1100型高效液相色谱仪(安捷伦公司)；2000型ELSD(Alltech公司)。1、2、3、4对照品(纯度均大于99.5％)及发酵液、提取液均由华北制药集团维尔康公司提供。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱ThermoQuest氨基色谱柱(4.6mm×250mm，5gm)；流动相A：0.1％三氟乙酸、B：乙腈，梯度洗脱见表1。ELSD雾化气Nz；流速2.5L／min；漂移管温度100~C。进样量20gl。表1流动相梯度表在上述色谱条件下，以“2.2”项下对照品溶液进样测定，结果见图1。由图1可见，1、2、3、4可有效分离，理论塔板数均大于1700。空白发酵液在5~20min无干扰杂质峰。某些酵母膏有微收稿日期：2004.07.23基金项目：国家“863”计划资助课题(2001AA223071)作者简介：耿文飞(1970)，男，高级工程师，从事药物分析。通讯联系人：贾茜(1968)，女，高级工程师，从事生物制药研究。Tel：0311—86680877E—nlail：jiaqian@ncpcrd.tom.cn量杂质在2和3之间出峰，但不影响定量。mAU450400350300250200150lOO5002.557.51012.51517.52022.5t／rain1——1；2——2；3——3；4——4图1对照品溶液HPLC色谱图2.2溶液配制对照品溶液：分别精密称取1、2、3、4对照品50mg置25ml量瓶中，以水溶解并定容，混匀。样品溶液：将发酵液或提取液离心(10000r／min)10min，取上清液精密稀释至适合浓度。2.3线性范围配制1、2、3、4浓度为0.4％、0.2％、0.1％、O.05％、0.025％的水溶液，分别进样测定，以各组分的峰面积A对相应浓度C作线性回归，得回归方程如下：1：A=6.5355×106C一3.2624×103(r=0.9965)：2：A=1.1936×10vC一4.2432×103(r=0.9995)；3：A=1.3046×107C一4.7997×103(r=0.9996)；4：A=1.2735×107C一4.5852×103(r=0.9965)。4组分均在0.025％～0.4％范围内线性关系良好。当S／N=3时，测得1、2、3和4检测限分别为1.0、0.4、O.4和0.4gg。